品牌 | SOLARBIO/索萊寶 | CAS | 詳詢 |
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分子式 | 詳詢 | 純度 | 詳詢 |
分子量 | 詳詢 | 貨號 | BC2045 |
規(guī)格 | 100T/48S | 供貨周期 | 現(xiàn)貨 |
主要用途 | 測定意義:淀粉*責水解淀粉,主要包括α-淀粉*和β-淀粉*。β-淀粉*(EC | 應(yīng)用領(lǐng)域 | 環(huán)保,化工,生物產(chǎn)業(yè),農(nóng)業(yè),綜合 |
β-淀粉*(
β-AL)活性檢測試劑盒說明書(DNS顯色法)
微量法
注意:本產(chǎn)品試劑有所變動,請注意并嚴格按照該說明書操作。
貨號:BC2045
規(guī)格:100T/48S
產(chǎn)品組成:使用前請認真核對試劑體積與瓶內(nèi)體積是否一致,有疑問請及時聯(lián)系索萊寶工作人員。
試劑名稱 | 規(guī)格 | 保存條件 |
試劑一 | 液體35 mL×1瓶 | 常溫保存 |
試劑二 | 液體10 mL×2瓶 | 2-8℃保存 |
試劑三 | 粉劑×2支 | 2-8℃保存 |
標準品 | 粉劑×1支 | 2-8℃保存 |
溶液的配制:
試劑一:若有黃色晶體析出,需加熱溶解后再用;
試劑二:臨用前取取1支試劑三加入到1瓶試劑二中,置于常溫水中并加熱至煮沸,期間不斷攪拌粉劑至溶解,用不完的試劑2-8℃保存4周;
標準品:10 mg無水*萄糖。臨用前加入1 mL蒸餾水配制成10 mg/mL的標準溶液,2-8℃保存兩周。
產(chǎn)品說明:
淀粉*負責水解淀粉,主要包括α-淀粉*和β-淀粉*。β-淀粉*(EC 3.2.1.2) 從淀粉的非還原端切開α-1,4糖苷鍵,生成葡萄糖、麥芽糖、麥芽三糖、糊精等還原糖。
還原糖還原3,5-二硝基水楊酸生成棕紅色物質(zhì)。α-淀粉*不耐酸,β-淀粉*不耐熱。根據(jù)上述特性,鈍化其中之一,就可測出另一種淀粉*的活力。
注意:實驗之前建議選擇2-3個預期差異大的樣本做預實驗。如果樣本吸光值不在測量范圍內(nèi)建議稀釋或者增加樣本量進行檢測。
需自備的儀器和用品:
可見分光光度計/酶標儀、水浴鍋、離心機、可調(diào)式移液器、96孔板/微量玻璃比色皿、研缽/勻漿器和蒸餾水。
操作步驟:具體操作步驟詳見“產(chǎn)品資料"附件
一、樣本處理(可適當調(diào)整待測樣本量,具體比例可以參考文獻)
稱取約0.1g樣本,加入0.8mL蒸餾水,研磨勻漿;將勻漿倒入離心管中,提取液在室溫下放置提取15min,每5min振蕩1次,使其充分提??;6000g,常溫離心10min,取上清液加蒸餾水定容至10mL,搖勻,即淀粉*原液。
吸取上述淀粉*原液1mL,加入4mL蒸餾水,搖勻,即為淀粉*稀釋液,用于(α+β)淀粉*總活力的測定。
二、測定步驟
可見分光光度計/酶標儀預熱30min以上,調(diào)節(jié)波長到540nm,分光光度計蒸餾水調(diào)零。
標準液的稀釋:將10mg/mL葡萄糖標準液用蒸餾水稀釋為0.5、0.25、0.125、0.0625、0.03125、0.015625、0.0078 mg/mL的標準溶液。
標準液稀釋可參考下表:
序號 | 稀釋前濃度(mg/mL) | 標準液體積(µL) | 蒸餾水體積(µL) | 稀釋后濃度(mg/mL) |
1 | 10 | 50 | 950 | 0.5 |
2 | 0.5 | 200 | 200 | 0.25 |
3 | 0.25 | 200 | 200 | 0.125 |
4 | 0.125 | 200 | 200 | 0.0625 |
5 | 0.0625 | 200 | 200 | 0.03125 |
6 | 0.03125 | 200 | 200 | 0.015625 |
7 | 0.015625 | 200 | 200 | 0.0078 |
備注:實驗中每個標準管需75µL標準溶液。
取2支EP管分別加入75μL淀粉*原液和淀粉*稀釋液,沸水浴5min,分別作為α-淀粉*對照管和總淀粉*對照管使用。
測定操作表:
試劑名稱(μL) | α淀粉*活力測定 | 總淀粉*活力測定 | 標準曲線測定 | |||||||||
對照管 | 測定管 | 對照管 | 測定管 | 標準管 | 空白管 | |||||||
淀粉*原液 | 75(煮沸) | 75 | - | - | - | - | ||||||
蒸餾水 | - | - | - | - | - | 75 | ||||||
標準溶液 | - | - | - | - | 75 | - | ||||||
置于70℃水浴鍋中準確反應(yīng)15min,冷卻至室溫 | ||||||||||||
淀粉*稀釋液 | - | - | 75(煮沸) | 75 | - | - | ||||||
試劑二 | - | 75 | - | 75 | - | - | ||||||
置于40℃水浴鍋中準確保溫5min | ||||||||||||
試劑一 | 150 | 150 | 150 | 150 | 150 | 150 | ||||||
試劑二 | 75 | - | 75 | - | 75 | 75 |
混勻,沸水浴10min,取200μL至96孔板或微量玻璃比色皿中,在540nm下測定吸光度,從左到右分別記為A1、A2、A3、A4、A5和A6,計算ΔAα=A2-A1,ΔA總=A4-A3,ΔA標準=A5-A6。每個測定管需設(shè)一個對照管。標準曲線和空白管只需測1-2次。
注意事項:
測定的吸光值大于1.5時,可以對樣本進行適當稀釋后測定。若吸光值過小,可以濃縮淀粉*稀釋液或者淀粉*原液。
參考文獻:
[1] Dziedzoave N T, Graffham A J, Westby A, et al. Influence of variety and growth environment on β-amylase activity of flour from sweet potato (Ipomea batatas)[J]. Food control, 2010, 21(2): 162-165.
相關(guān)系列產(chǎn)品:
BC0700/BC0705 淀粉含量檢測試劑盒
BC0610/BC0615 α-淀粉*(α-AL)活性檢測試劑盒
BC0430/BC0435 ADPG焦磷酸化酶(AGP)活性檢測試劑盒
β-淀粉*活性檢測試劑盒 微量法 β-淀粉*活性檢測試劑盒 微量法