一、血液的采集
常用的采血方法有割(剪)尾采血、眼眶靜脈叢采血、斷頭采血、心臟采血、頸靜脈(動(dòng)脈)采血、股動(dòng)脈(靜脈)采血、耳靜脈采血、前肢頭靜脈才學(xué)、后肢小靜脈采血等。
二、尿液的采集
實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的尿液常用代謝籠采集,也可通過(guò)其他裝置來(lái)采集。
(一)用代謝籠采集尿液
代謝籠用于收集實(shí)驗(yàn)動(dòng)物自然排出的尿液,是一種特別設(shè)計(jì)的為采集實(shí)驗(yàn)動(dòng)物各種排泄物的密封式飼養(yǎng)籠,有的代謝籠除可收集尿液外,又可收集糞便和動(dòng)物呼出的CO2。一般簡(jiǎn)單的代謝籠主要用來(lái)收集尿液。防在代謝籠內(nèi)飼養(yǎng)的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物,可通過(guò)其特殊裝置收集尿液。
(二)導(dǎo)尿法收集尿液
施行導(dǎo)尿術(shù),較適宜于犬、猴等大動(dòng)物。一般不需要麻醉,導(dǎo)尿時(shí)將實(shí)驗(yàn)動(dòng)物仰臥固定,用甘油潤(rùn)滑導(dǎo)尿管。對(duì)雄性動(dòng)物,操作員用一只手握住陰J,另一只手將陰J包皮向下,暴露龜T,使尿道口張開(kāi),將導(dǎo)尿管緩慢插入,導(dǎo)尿管推進(jìn)到尿道膜部時(shí)有抵抗感,此時(shí)注意動(dòng)作輕柔,繼續(xù)向膀胱推進(jìn)導(dǎo)尿管,即有尿液流出。雌性動(dòng)物尿道外口在陰D前庭,導(dǎo)尿時(shí)于陰D前庭腹側(cè)將導(dǎo)尿管插入陰D外口,其后操作同雄性動(dòng)物導(dǎo)尿術(shù)。
用導(dǎo)尿法導(dǎo)尿可采集到?jīng)]有污染的尿液。如果嚴(yán)格執(zhí)行無(wú)菌操作,可收集到無(wú)菌尿液。
(三)輸尿管插管采集尿液
一般用于要求計(jì)量單位時(shí)間內(nèi)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物排尿量的實(shí)驗(yàn)。剖腹后,將膀胱牽拉腹腔外,暴露膀胱底兩側(cè)的輸尿管。在兩側(cè)輸尿管近膀胱處用線(xiàn)分別結(jié)扎,于輸尿管結(jié)扎處上方剪一小口,向腎臟方向分別插入充滿(mǎn)生理鹽水的插管,用線(xiàn)結(jié)扎固定插管,即可見(jiàn)尿液從插管滴出,可以收集。采尿過(guò)程中要用38℃熱生理鹽水紗布遮蓋切口及膀胱。
(四)壓迫膀胱采集尿液
實(shí)驗(yàn)人員用手在實(shí)驗(yàn)動(dòng)物下腹部加壓,手法既輕柔又有力。當(dāng)增加的壓力使實(shí)驗(yàn)動(dòng)物膀胱括約肌松弛時(shí),尿液會(huì)自動(dòng)流出,即行收集。
(五)穿刺膀胱采集尿液
實(shí)驗(yàn)動(dòng)物麻醉固定后,剪去下腹部恥骨聯(lián)合之上,腹正中線(xiàn)兩側(cè)的被毛,消毒后用注射針頭接注射器穿刺。取鈍角進(jìn)針,針頭穿過(guò)皮膚后稍微改變角度,以避免穿刺后漏尿,然后刺向膀胱方向,邊緩慢進(jìn)針邊回抽,直到抽到尿液為止。
(六)剖腹采集尿液
按上述穿刺膀胱采集尿液法做術(shù)前準(zhǔn)備,其皮膚準(zhǔn)備范圍應(yīng)更大。剖腹暴露膀胱,直視下穿刺膀胱抽取尿液。也可于穿刺前用無(wú)齒鑷夾住部分膀胱壁,從鑷子下方的膀胱壁進(jìn)針抽尿。
(七)提鼠采集尿液(即反射排尿法)
鼠類(lèi)被人抓住尾巴提起即出現(xiàn)排尿反射,以小鼠的這種反射明顯??梢岳眠@一反射收集尿液。當(dāng)鼠類(lèi)被提起尾巴排尿后,尿滴掛在尿道外口附近的被毛上,不會(huì)馬上流走,操作人員應(yīng)迅速用吸管或玻璃管接住尿滴。
(八)膀胱插管法
腹部手術(shù)同輸尿管插管。將膀胱翻出腹外后,用絲線(xiàn)結(jié)扎膀胱頸部,阻斷它同尿道的通路。然后在膀胱頂部避開(kāi)血管剪一小口,插入膀胱漏斗,用絲線(xiàn)做以荷包縫合固定。漏斗好正對(duì)著輸尿管的入口處。注意不要緊貼膀胱后壁而堵塞輸尿管。下端接橡皮管插入帶刻度的容器內(nèi)以收集尿液。
三、胸水和腹水的采集
(一)胸水的采集
主要采用胸腔穿刺法收集實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的胸水,也可處死實(shí)驗(yàn)動(dòng)物剖開(kāi)胸腔采集胸水。
1、穿刺點(diǎn)定位
于實(shí)驗(yàn)動(dòng)物腋后線(xiàn)第11~12肋間隙穿刺,穿刺針緊貼肋骨上緣,否則容易損傷肋間神經(jīng)。也可在胸壁近胸骨左側(cè)緣第4~5肋間隙穿刺。
2、穿刺方法
收集胸水常采用穿刺法。如果實(shí)驗(yàn)不要求動(dòng)物繼續(xù)存活,也可用處死動(dòng)物剖胸取胸水。穿刺部位在動(dòng)物脊側(cè)腋后線(xiàn)胸壁第11~12肋間隙穿刺較安全。此部位是肺下界之外側(cè),既可避免損傷肺組織造成氣胸,又易采集在隔肋竇的胸水。此外,也可在腹側(cè)胸壁近胸骨左側(cè)緣第4~5肋間隙穿刺。如果有條件在穿刺針頭與注射器之間連一個(gè)三通管,但應(yīng)注意正確運(yùn)用三通管。
實(shí)驗(yàn)動(dòng)物取立位或半臥位固定,局部皮膚去毛、消毒、麻醉,穿刺針頭與注射器之間接三通連接裝置,實(shí)驗(yàn)人員以左手拇指、食指繃緊局部皮膚,右手用帶夾的橡皮管套上12~14號(hào)針頭,沿肋骨前緣小心地垂直刺入(緊靠肋骨下緣處垂直進(jìn)針),穿刺肋間肌時(shí)產(chǎn)生一定阻力,當(dāng)阻力消失有落空感時(shí),說(shuō)明已刺入胸膜腔,用左手固定穿刺針,打開(kāi)三通連接裝置,緩慢抽取胸水。穿刺結(jié)束迅速拔出針頭,輕揉穿刺部位,促進(jìn)針孔閉合并注意消毒。
操作中嚴(yán)防空氣進(jìn)入胸腔,始終保持胸腔負(fù)壓。穿刺應(yīng)用手控制針頭的深度,以防穿刺過(guò)深刺傷肺臟。
(二)腹水的采集
1、抽取狗等大動(dòng)物腹水,讓狗按自然站立位固定,穿刺部位在恥骨前緣與臍之間,腹中線(xiàn)兩側(cè)。剪毛消毒,局部浸潤(rùn)麻醉。操作者左手姆、食指緊繃穿刺部位的皮膚,右手控制穿刺深度做垂直穿刺。注意不可刺的太深,以免刺傷內(nèi)臟。穿刺針進(jìn)入腹腔后,腹水多時(shí)可見(jiàn)因腹壓高而自動(dòng)流出。腹水太少可輕輕回抽,并同時(shí)稍稍轉(zhuǎn)動(dòng)一下針頭,一旦有腹水流出,立即固定好針頭及注射器的位置連續(xù)抽取。
2、抽取大鼠、小鼠的腹水方法簡(jiǎn)單,用左手拇指及食指捏住動(dòng)物頸部皮膚,無(wú)名指、小手指及手掌夾住其尾巴固定好動(dòng)物,使其腹部略朝上,在腹股溝和腹中線(xiàn)之間,消毒皮膚,用8號(hào)針頭刺入腹腔,如腹壓高腹水自然流出,如腹水太少,可借助注射器抽取。
抽腹水時(shí)注意不可速度太快,腹水多時(shí)不要一次大量抽出,以免因腹壓突然下降導(dǎo)致動(dòng)物出現(xiàn)循環(huán)功能障礙等問(wèn)題。
四、 分泌液的采集
(一)陰D分泌物的采集
適于觀察陰D角質(zhì)化上皮細(xì)胞。
1、 滴管沖洗法
用消毒滴管吸取少量生理鹽水仔細(xì)、反復(fù)沖洗被檢雌性動(dòng)物陰D,將沖洗液吸出滴在載波片上晾干后染色鏡檢。也可直接將沖洗液置于低倍顯微鏡下觀察,根據(jù)細(xì)胞類(lèi)型變化鑒別實(shí)驗(yàn)動(dòng)物動(dòng)情周期中的不同時(shí)期。
2、棉拭子法
用消毒棉拭子旋轉(zhuǎn)插入動(dòng)物陰D內(nèi),然后在陰D內(nèi)輕輕轉(zhuǎn)動(dòng)幾下后取出,即可進(jìn)行涂片鏡檢。有的動(dòng)物如大、小鼠等,陰D液較少,取其陰D液時(shí),可用先浸濕后又?jǐn)D盡無(wú)菌生理鹽水的棉拭子取陰D液,這種棉拭子比干棉拭子容易插入陰D。對(duì)體型較大的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物,也可先按摩或刺激其陰部,而后再采集其陰D液。
3、刮取法
用光滑的玻璃小勺或牛角制的小刮片慢慢插入陰D內(nèi),在陰D壁輕輕刮取一點(diǎn)陰D內(nèi)含物,進(jìn)行涂片鏡檢。
(二)精液(semen)的采集
1、人工陰D套采精液法
本法適用于犬、豬、羊等大動(dòng)物,采用特制的人工陰D套套在實(shí)驗(yàn)動(dòng)物陰J上采集精液。采精時(shí),一手捏住陰D套,套住雄性動(dòng)物的陰J,以*套住雄性動(dòng)物的陰J為佳,插入陰D套后,若實(shí)驗(yàn)動(dòng)物發(fā)出低叫聲,表明已經(jīng)射精。此時(shí)可取下陰D套,拆下采精瓶,取出精液,迅速做有關(guān)檢查。
2、陰D栓采精法
本法是將陰D栓涂片染色,鏡檢凝固的精液。陰D栓是雄性大、小鼠的精液和雌性陰D分泌物混合,在雌鼠陰D內(nèi)凝結(jié)而成白色稍透明、圓錐形的栓狀物,一般交配后2~4小時(shí)即可在雌鼠陰D口形成,并可在陰D停留12~24小時(shí)。
3、其他采精液法
將發(fā)情的雌性動(dòng)物放在雄性動(dòng)物一起,當(dāng)雄性動(dòng)物被刺激發(fā)情后,立即將雄性動(dòng)物分開(kāi),再用人工法刺激其射精。也可按摩雄性動(dòng)物的生殖器或用電流等物理方法刺激雄性動(dòng)物的陰J或其他性敏感區(qū),使雄性動(dòng)物被刺激發(fā)情,直射精,用采精瓶采集射出的精液。
(三)乳汁的采集
用按摩擠奶收集乳汁的方法適合犬、豬、羊等大動(dòng)物乳汁的采集。選用哺乳期的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物,在早上采集乳汁量多,用手指輕輕按摩實(shí)驗(yàn)動(dòng)物乳頭,使乳汁自然流出,如乳汁不能自然流出,可張開(kāi)手掌從乳房基底部朝乳頭方向按摩、擠壓整個(gè)乳房,即可擠出乳汁。
五、消化液的采集
(一) 唾液
1、直接抽取法
在急性實(shí)驗(yàn)中,可用吸管直接插入動(dòng)物口腔或唾液腺導(dǎo)管抽吸唾液,此法非常簡(jiǎn)單,但從口腔抽吸唾液會(huì)有雜質(zhì)混入。
2、制造腮腺瘺法
在慢性實(shí)驗(yàn)中,收集狗的唾液,要用外科手術(shù)方法將腮腺導(dǎo)管開(kāi)口移向體外,即以腮腺導(dǎo)管為中心,切成一直徑約2~3cm的圓形粘膜片,將此粘膜片,與周?chē)M織分開(kāi),穿過(guò)皮膚切口引到頰外,將帶有導(dǎo)管開(kāi)口的粘膜片與周?chē)钠つw縫合,腮腺分泌的唾液就流出頰外。這種方法可以收集到較純凈的唾液。
(二)胃液
1、直接收集胃液法
急性實(shí)驗(yàn)時(shí),先將動(dòng)物麻醉,將插胃管經(jīng)口插入胃內(nèi),在灌胃管的出口連一注射器,用此注射器可收集到胃液,此法適用于狗等大型動(dòng)物。如是大鼠,需手術(shù)剖腹,從幽門(mén)端向胃內(nèi)插入一塑料管,再由口腔經(jīng)食道將一塑料管插入前胃,用pH7.5、35℃左右的生理鹽水,以12ml/h的流速灌胃,收集流出液,進(jìn)行分析。
2、制備胃瘺法
在慢性實(shí)驗(yàn)中,收集胃液多用胃瘺法,如全胃瘺法、巴氏小胃瘺法、海氏小胃瘺法等。制備小胃是將動(dòng)物的胃分離出一小部分,縫合起來(lái)形成小胃,主胃與小胃互不相通,主胃進(jìn)行正常消化,從小胃可收集到純凈的胃液。應(yīng)用該法,可以待動(dòng)物恢復(fù)健康后,在動(dòng)物清醒狀態(tài)下反復(fù)采集胃液。
(三)胰液和膽汁
在動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中,主要是通過(guò)對(duì)胰總管和膽總管的插管而獲得胰液或膽汁。狗的胰總管開(kāi)口于十二指腸降部,在緊靠腸壁處切開(kāi)胰管,結(jié)扎固定并與導(dǎo)管相連,即可見(jiàn)無(wú)色的胰液流入導(dǎo)管。大鼠的胰管與膽管匯集于一個(gè)總管,在其入腸處插管固定,并在近肝門(mén)處結(jié)扎和另行插管,可分別收集到胰液和膽汁。有時(shí)也可通過(guò)制備胰瘺和膽囊瘺來(lái)獲得胰液和膽汁。
六、腦脊液的采集
(一)狗、兔腦脊液的采集通常采取脊髓穿刺法
穿刺部位在兩髂連線(xiàn)中點(diǎn)稍下方第七腰椎間隙。動(dòng)物輕度麻醉后,側(cè)臥位固定,使頭部及尾部向腰部盡量彎曲,剪去第七腰椎周?chē)谋幻O竞蟛僮髡咴趧?dòng)物背部用左手姆、食指固定穿刺部位的皮膚,右手持腰穿刺針垂直刺入,當(dāng)有落空感及動(dòng)物的后肢跳動(dòng)時(shí),表明針已達(dá)椎管內(nèi)(蛛網(wǎng)膜下腔),抽去針芯,即見(jiàn)腦脊液流出。如果無(wú)腦脊液流出,可能是沒(méi)有刺破蛛網(wǎng)膜。輕輕調(diào)節(jié)進(jìn)針?lè)较蚣敖嵌?,如果腦脊液流的太快,插入針芯稍加阻塞,以免導(dǎo)致顱內(nèi)壓突然下降而形成腦疝。
(二)大鼠腦脊液的采集可采用枕大孔直接穿刺法
在大鼠麻醉后,頭部固定于定向儀上。頭頸部剪毛、消毒,用手術(shù)刀沿縱軸切一縱行切口(約2cm)用剪刀鈍性分離頸部背側(cè)肌肉。為避免出血,深層附著在骨上的肌肉用手術(shù)刀背刮開(kāi),暴露出枕骨大孔。由枕骨大孔進(jìn)針直接抽取腦脊液。抽取完畢逢好外層肌肉、皮膚。刀口處可撒些磺胺藥粉,防止感染。采完腦脊液后,應(yīng)注入等量的消毒生理鹽水,以保持原來(lái)腦脊髓腔的壓力。
七、骨髓的采集
1、大鼠、小鼠骨髓的采集
用頸椎脫臼法處死動(dòng)物,剝離出胸骨或股骨,用注射器吸取少量的Hank平衡鹽溶液,沖洗出胸骨或股骨中全部骨髓液。如果是取少量的骨髓作檢查,可將胸骨或股骨剪斷,將其斷面的骨髓擠在有稀釋液的玻片上,混勻后涂片涼干即可染色檢查。
2、大動(dòng)物骨髓的采集
狗等大動(dòng)物骨髓的采集可采取活體穿刺方法。先將動(dòng)物麻醉、固定、局部除毛、消毒皮膚,然后估計(jì)好皮膚到骨髓的距離,把骨髓穿刺針的長(zhǎng)度固定好。操作人員用左手把穿刺點(diǎn)周?chē)钠つw繃緊,右手將穿刺針在穿刺點(diǎn)垂直刺入,穿入固定后,輕輕左右旋轉(zhuǎn)將穿刺針鉆入,當(dāng)穿刺針進(jìn)入骨髓腔時(shí)常有落空感。狗骨髓的采集,一般采用髂骨穿刺。狗等大動(dòng)物常用的骨髓穿刺點(diǎn):胸骨:穿刺部位是胸骨體與胸骨柄連接處。肋骨:穿刺部位是第5~7肋骨各點(diǎn)的中點(diǎn)。脛骨:穿刺部位是股骨內(nèi)側(cè)、靠下端的凹面處。如果穿刺采用的是肋骨,穿刺結(jié)束后要用膠布封貼穿刺孔,防止發(fā)生氣胸。