在流式細(xì)胞檢測(cè)技術(shù)發(fā)展的幾十年中,熒光成為了其發(fā)展軌跡上重要代名詞之一。在流式細(xì)胞檢測(cè)實(shí)驗(yàn)中,應(yīng)用各種熒光素標(biāo)記抗體是必不可少的。那么常用的流式熒光染料有哪些呢?
一、有機(jī)小分子
這類染料是具有歷史、應(yīng)用廣泛且相對(duì)較小的熒光化合物。有了國(guó)外研究基礎(chǔ),國(guó)內(nèi)公司也陸續(xù)開始擁有自己專屬染料。
二、藻膽蛋白
從各種藻類中提取的大蛋白分子。與化學(xué)合成熒光染料相比,藻膽蛋白熒光量子產(chǎn)率超過90%、具備相對(duì)高的消光系數(shù),且能夠發(fā)出強(qiáng)烈熒光信號(hào)。
在聚合物染料沒出現(xiàn)之前,PE和APC是亮的染料,也是搭配低豐度抗原選擇。不過,藻膽蛋白很容易受光漂白影響,因此不推薦長(zhǎng)時(shí)間或反復(fù)暴露于激發(fā)源的應(yīng)用。
三、串聯(lián)染料
一個(gè)具有供體染料分子的激發(fā)和受體染料分子的發(fā)射性質(zhì)的獨(dú)特?zé)晒饣鶊F(tuán)。利用熒光共振能量轉(zhuǎn)移(FRET)的現(xiàn)象,即兩個(gè)熒光分子中供體的發(fā)射光譜與受體的激發(fā)光譜重疊,且位置上距離很近時(shí),會(huì)產(chǎn)生能量的轉(zhuǎn)移情況,此時(shí)供體熒光分子的熒光信號(hào)發(fā)生淬滅,而受體熒光分子的熒光強(qiáng)度顯著增強(qiáng)。
比起單分子染料,串聯(lián)染料不僅在熒光亮度上明顯增強(qiáng),還可在單一激發(fā)器中實(shí)現(xiàn)更大的發(fā)射波長(zhǎng),使得檢測(cè)紅外區(qū)域的光譜成為可能。一個(gè)激發(fā)光源就可以使用多個(gè)染料進(jìn)行研究,這依賴于串聯(lián)染料擴(kuò)展斯托克斯位移值(150-300nm),即激發(fā)與發(fā)射波長(zhǎng)的差值。
隨著科研、IVD領(lǐng)域技術(shù)勢(shì)頭飛速發(fā)展,儀器不斷地迭代更新,流式細(xì)胞檢測(cè)技術(shù)手段已經(jīng)十分成熟,僅僅單激光、單通道的流式分析,已經(jīng)不能滿足科研人員需求,目前的單激光、多通道流式檢測(cè)技術(shù),無論在免疫療法、細(xì)胞分選、生物制藥等其它領(lǐng)域都受到高度青睞。