草酸銨結(jié)晶紫染色液是一種組織或細(xì)胞染色時(shí)常用的可以把細(xì)胞核染成深紫色的染色液。結(jié)晶紫是一種堿性染料,可以和細(xì)胞核中的DNA結(jié)合,從而產(chǎn)生細(xì)胞核染色。
染色液主要由草酸銨、結(jié)晶紫、乙醇等組成。革蘭陽性菌染色中,細(xì)胞經(jīng)草酸銨結(jié)晶紫染色后再經(jīng)Gram碘液處理,形成不溶性復(fù)合物,該復(fù)合物不能通過細(xì)胞壁,不易被脫色,所以保持紫色。
草酸銨結(jié)晶紫染色液操作步驟(僅供參考):
1、涂片:取待檢細(xì)菌,于載玻片中央涂成薄層或者在載玻片上滴加少許無菌水,取菌與水混合均勻,涂成薄層。
2、干燥:涂片后在室溫下自然干燥,也可在酒精燈上略加溫,使之迅速干燥。
3、固定:手持載玻片一端,標(biāo)本面朝上,在酒精燈的火焰外側(cè)快速來回移動(dòng)3~5次,每次1s,溫度不宜過高,防止菌體蛋白變性,放置待涼后染色。也可以用甲醇戒乙醇固定。
4、初染:滴加結(jié)晶紫染色液染色1-2min,清水沖洗去染色液。
5、媒染:滴加Gram碘液,并覆蓋載玻片室溫放置1-2min,水洗。
6、脫色:滴加脫色液搖動(dòng),搖動(dòng)10~30s,直至流下的脫色液不出現(xiàn)紫色為止,立即用水沖去脫色液,終止反應(yīng)。
7、復(fù)染:滴加沙黃染色液染色,30~60s,水洗。
8、干燥。鏡檢:置油鏡觀察。
染色結(jié)果:革蘭氏陽性菌:藍(lán)色至紫色;革蘭氏陰性菌:紅色。
草酸銨結(jié)晶紫染色液的關(guān)鍵在于嚴(yán)格掌握脫色程度,脫色時(shí)間應(yīng)根據(jù)經(jīng)驗(yàn)判斷。脫色過度,陽性菌可被誤染為陰性菌;脫色不夠,陰性菌可被誤染為陽性菌。