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Bradford蛋白濃度測(cè)定試劑盒使用說(shuō)明

發(fā)布日期: 2011-06-08
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保存條件: G250染色液4℃保存,蛋白標(biāo)準(zhǔn)-20℃保存,本試劑盒自訂購(gòu)之日起九個(gè)月內(nèi)有效。

Bradford蛋白濃度測(cè)定試劑盒特點(diǎn):

1.Bradford蛋白濃度測(cè)定試劑盒是根據(jù)目前世界上常用的兩種蛋白濃度檢測(cè)方法之一Bradford 法研制而成,實(shí)現(xiàn)了蛋白濃度測(cè)定的快速,穩(wěn)定和高靈敏度。
2.檢測(cè)速度極快,10-20個(gè)樣品只需不足10分鐘即可完成。 
3. 靈敏度高,檢測(cè)濃度下限達(dá)到25微克/毫升,小檢測(cè)蛋白量達(dá)到0.5微克,待測(cè)樣品體積為1-20微升。  在50-1000微克/毫升濃度范圍內(nèi)有較好的線性關(guān)系。
4.不象一些其它蛋白濃度測(cè)定方法(包括Lowry法),Bradford法測(cè)定蛋白濃度不受絕大部分樣品中的化學(xué)物質(zhì)的影響。樣品中巰基乙醇的濃度可高達(dá)1M,二硫蘇糖醇的濃度可高達(dá)5mM。但受略高濃度的去垢劑影響。需確保SDS低于0.1%,Triton X-100 低于0.1%,Tween 20, 60, 80低于0.06%。含去垢劑的樣品推薦使用碧云天的BCA蛋白濃度測(cè)定試劑盒。
5.Bradford蛋白濃度測(cè)定試劑盒對(duì)樣品中各種物質(zhì)詳細(xì)的兼容性表,參見Bradford蛋白濃度測(cè)定兼容性表。
Ø 每個(gè)試劑盒可以檢測(cè)1000個(gè)樣品。

Bradford蛋白濃度測(cè)定試劑盒使用說(shuō)明:
1. *溶解蛋白標(biāo)準(zhǔn)品,取10ml稀釋100ml ,使終濃度為0.5mg/ml。蛋白樣品在什么溶液中,標(biāo)準(zhǔn)品也宜用什么溶液稀釋。
但是為了簡(jiǎn)便起見,也可以用0.9%NaCl或PBS稀釋標(biāo)準(zhǔn)品。
2. 將標(biāo)準(zhǔn)品按0, 1, 2, 4, 8, 12, 16, 20微升分別加到96孔板中,加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液補(bǔ)足到20微升。
3. 加適當(dāng)體積樣品到96孔板的樣品孔中,加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液到20微升。
4. 各孔加入200微升G250染色液,室溫放置3-5分鐘。
5. 用酶標(biāo)儀測(cè)定A595,或560-610nm之間的其它波長(zhǎng)的吸光度。
6. 根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算出樣品中的蛋白濃度。

Bradford蛋白濃度測(cè)定試劑盒注意事項(xiàng): 
1. G250染色液使用前請(qǐng)顛倒3-5次,混勻。
2.蛋白標(biāo)準(zhǔn)請(qǐng)?jiān)谌咳芙夂笙然靹颍傧♂尦梢幌盗胁煌瑵舛鹊牡鞍讟?biāo)準(zhǔn)。
3.由于 Bradford方法本身的局限性,得到的標(biāo)準(zhǔn)曲線只是在一定范圍內(nèi)可以近似看成直線,要得到更為的蛋白濃度結(jié)果,可以參照實(shí)際測(cè)得的標(biāo)準(zhǔn)曲線大致計(jì)算出較為的蛋白濃度。
4.將G250染色液回復(fù)到室溫再使用,有利于提高檢測(cè)的靈敏度。
5.需可檢測(cè)560-610nm之間波長(zhǎng)的酶標(biāo)儀一臺(tái),佳檢測(cè)波長(zhǎng)為595nm。并需96孔板。如果沒(méi)有酶標(biāo)儀,也可以使用普通的分光光度計(jì)測(cè)定,但是測(cè)定蛋白濃度時(shí),需根據(jù)測(cè)定吸光度的杯子的體積,按比例調(diào)整G250 染色液和樣品的體積。使用分光光度計(jì)測(cè)定蛋白濃度時(shí),每個(gè)試劑盒可以測(cè)定的樣品數(shù)量可能會(huì)顯著減少。
6.為了您的安全和健康,請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。

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