DAB染色液用于免疫組化染色,應(yīng)用在Dako 自動染色系統(tǒng)上。
DAB染色液的使用方法
1.DAB顯色液配制
10mM Tris-HCl (pH7.6) 9mL +DAB (diaminobezidin 3,3-二氨基聯(lián)苯胺) +0.3%(W/V) NiCl2 或CoCl2 1mL ,顯色時加入5-10mL 30%H2O2 混勻后立即使用
2. 顯色
準(zhǔn)備好含有待測蛋白的固相膜:包括電泳、轉(zhuǎn)印、封阻、一抗(或生物素)處理、辣根過氧化酶(HRP)標(biāo)記的二抗(或鏈霉親和素)處理、清洗等步驟。
3.加入適量的DAB顯色液,鋪滿整個固相膜表面(可按比例增減)。
4. 置于平式搖蕩儀上,在室溫下孵育25分 鐘,避免光照(暗室操作),直棕褐色沉淀出現(xiàn)。
5.用鑷子夾起固相膜,放進(jìn)無離子水里清洗。
6.空氣中晾干。
7. 拍照記錄 。
DAB染色液的注意事項(xiàng)
1. DAB溶液應(yīng)低溫密封保存。如有結(jié)晶析出,應(yīng)確保結(jié)晶*溶解再行使用;
2. 顯色工作液應(yīng)現(xiàn)用現(xiàn)配,新鮮配制的工作液應(yīng)為無色或淺棕色,如顏色過深,請勿使用;
3. DAB在常溫下不穩(wěn)定,每次取用后均應(yīng)及時加蓋密封放回冰箱,以免因DAB分解影響實(shí)驗(yàn),或因滲漏造成實(shí)驗(yàn)環(huán)境污染;
4. DAB有潛在致突變作用,操作時應(yīng)注意穿戴好防護(hù)用具。